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小鼠elisa试剂盒在试验中以下几点至关重要

浏览次数:145发布日期:2022-05-29
  
  小鼠elisa试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
  小鼠elisa试剂盒在试验过程中这几点非常重要:
  1、重要的洗刷:
  不充分的洗刷会导致差异和高布景,从而带来不抱负的试验结果。假如未结合的材料残留在微孔板中,那么它会添加布景噪音。有必要的话,可添加洗刷液中的盐浓度,这会阻止非特异结合反响。假如布景过高,置疑洗刷不行时,能够测验添加洗刷次数。
  2、关键的关闭:
  关闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的时机。假如布景过高,置疑关闭不充分,那么能够测验运用更高浓度的关闭液,或适当延伸关闭时间。
  现在主要有两种类型的关闭液:蛋白和非离子型去污剂。ELISA试剂盒运用的类型须取决于多个因素,包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、抗体和检测试剂。好的关闭液应降低非特异性结合,但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。
  3、抗体浓度须优化:
  假如试剂稍有不同,则或许需求优化抗体的量。非特异的抗体结合会添加布景。为了防止这一点,切勿运用过多的一抗或二抗。
  4、检测试剂要适量:
  切勿运用过多的检测试剂。假如浓度过高,ELISA试剂盒或许未正确稀释,则会导致高布景。也不要显色过度,如有必要,优化一下何时应加入终止液。
  只要确保每一步操作都做到位,才会出现的试验结果。所以ELISA试验的每一步都很重要,不能够漫不经心。
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